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应用RD-PCR技术制备HIV基因芯片探针
RD-PCR HIV DNA芯片
2008/1/5
摘要 利用限制性显示 (RD PCR)技术快速分离HIV 1基因片段制备DNA芯片探针 .以Sau3AⅠ酶切HIV基因 ,得到许多大小适合芯片的限制性酶切片段 .然后在片段两端接上接头 ,根据酶切位点、接头的序列设计通用引物 .在该通用引物的 3′端分别延伸一个碱基后 ,通过引物间的两两组合 ,将PCR反应分成 10个亚组 .纯化各组PCR产物 ,克隆到T载体上 .阳性克隆经鉴定、扩大培养后提取质...
大肠杆菌poly(A)化mRNA基因片段的RD-PCR克隆
大肠杆菌
2007/7/25
除组蛋白mRNA等极少数mRNA外，真核生物mRNA 3'端普遍存在poly(A)尾，其长度在80~200 bp之间，特异地加于mRNA 3'端AAUAAA序列下游10~30碱基处，对于mRNA的翻译和稳定均起重要的作用。细菌mRNA代谢快速且高效，在体内很不稳定，半衰期可从30 s到20 min，多为几分钟[1]。由于细菌mRNA的不稳定，且细菌中与mRNA代谢有关的基因在功能上普遍存在重叠和冗...
应用RD-PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针
2007/7/25
K562细胞是从一慢性粒细胞急性变患者胸水中培养建株而成。该细胞恶性程度高，增殖快，但在培养过程中能被多种物质诱导向良性方向分化[1][2]，即在细胞中表达有正常红细胞特征的β-珠蛋白，因此已被广泛应用于研究人的红系细胞分化调控。但细胞分化是一个多基因参与的共同结果，为能在基因水平上对K562细胞的分化进行综合研究，我们应用限制性显示PCR技术(RD-PCR技术)[3][4]制备K562细胞表达谱...